Բովանդակություն:

Ինչու՞ է անհրաժեշտ PCR արտադրանքը մաքրել հաջորդականությունից առաջ:
Ինչու՞ է անհրաժեշտ PCR արտադրանքը մաքրել հաջորդականությունից առաջ:

Video: Ինչու՞ է անհրաժեշտ PCR արտադրանքը մաքրել հաջորդականությունից առաջ:

Video: Ինչու՞ է անհրաժեշտ PCR արտադրանքը մաքրել հաջորդականությունից առաջ:
Video: Մենք այս արտադրանքը օգտագործում ենք սածիլների համար հինգ տարի: Միշտ հիանալի արդյունք: 2024, Նոյեմբեր
Anonim

Ցանկալի ստուգում արտադրանքը է էական , որը ներառում է ոչ կոնկրետի բացակայությունը հաստատելը ապրանքներ և այբբենարանի դիմերներ: Մաքուր - վերև ռեակցիայի խառնուրդը նույնպես անհրաժեշտ հեռացնել չներառված պրայմերները և dNTP-ները, որոնք կարող են խանգարել հետագա ռեակցիաներին և հանգեցնել անընթեռնելի հաջորդականության:

Բացի այդ, ինչո՞ւ է անհրաժեշտ ՊՇՌ արտադրանքի մաքրումը։

Դու կարիք ունես մաքրել PCR արտադրանքը ազատվել չօգտագործված պրայմերներից, նուկլեոտիդներից և ֆերմենտներից՝ կապակցման հաջողությունը օպտիմալացնելու համար, որը կպահպանի և կհերթականի արտադրանքը -ից ՊՇՌ . Դեպի մաքրել որ PCR արտադրանք , օգտագործվում է չափի բացառման քրոմատոգրաֆիա։

Կարելի է նաև հարցնել՝ պե՞տք է արդյոք մաքրել PCR արտադրանքը մինչև սահմանափակող էնդոնուկլեազի մարսումը: Մեծամասնությունը սահմանափակում ֆերմենտները ակտիվ են ՊՇՌ բուֆերներ. Կլոնավորման դիմումների համար, մաքրում -ից PCR արտադրանքը մարսելուց առաջ է անհրաժեշտ հեռացնել ակտիվ թերմոֆիլ ԴՆԹ պոլիմերազը, որը առկա է ՊՇՌ խառնուրդ. ԴՆԹ պոլիմերազները կարող են փոխել ճեղքված ԴՆԹ-ի ծայրերը և նվազեցնել կապակցման ելքը:

Մարդիկ նաև հարցնում են՝ ինչպե՞ս եք պատրաստում PCR արտադրանքները հաջորդականացման համար:

PCR արտադրանքի ուղղակի հաջորդականություն

  1. Համոզվեք, որ դուք ուժեղացրել եք ճիշտ հատվածը:
  2. Դուք պետք է հեռացնեք բոլոր մնացորդային PCR պրայմերները և չներառված նուկլեոտիդները:
  3. Եթե PCR պրայմերները կլինեն նաև հաջորդականության այբբենարան(ներ), համոզվեք, որ դրանք համապատասխանում են մեր պայմաններին:
  4. Մի չափազանցեք նմուշը:

Կարո՞ղ եք հաջորդականացնել PCR արտադրանքը:

Ուղղակի Հերթականություն -ից PCR արտադրանք . Հերթականություն օգտագործում է միայն մեկ այբբենարան՝ օգտագործված երկուսի փոխարեն ՊՇՌ . Եթե դու անես չհեռացնել երկու այբբենարանները, դու պետք է ստանալ երկու հաջորդականություններ միմյանց վրա դրված, որոնք ընթեռնելի չեն: Լավ է օգտագործել a ՊՇՌ այբբենարան համար հաջորդականություն քանի դեռ այն համապատասխանում է մեր պայմաններին:

Խորհուրդ ենք տալիս: