Video: Ինչպե՞ս է գործում Sanger ԴՆԹ-ի հաջորդականությունը:
2024 Հեղինակ: Stanley Ellington | [email protected]. Վերջին փոփոխված: 2023-12-16 00:18
Սանգերի հաջորդականացում հանգեցնում է տարբեր երկարությունների երկարացման արտադրանքների ձևավորմանը, որոնք ավարտվում են դիդեօքսինուկլեոտիդներով 3 'վերջում: Այնուհետև ընդլայնման արտադրանքները բաժանվում են մազանոթային էլեկտրոֆորեզով կամ CE-ով: Մոլեկուլները էլեկտրական հոսանքով ներարկվում են գել պոլիմերով լցված երկար ապակյա մազանոթի մեջ:
Այս կերպ, ո՞րն է ԴՆԹ-ի հաջորդականության Սանգերի մեթոդը:
Սանգերի հաջորդականությունը , որը նաև հայտնի է որպես շղթայի ավարտ մեթոդ , դա տեխնիկա է ԴՆԹ -ի հաջորդականացում հիմնված շղթայի վերջավորությամբ դեէօքսինուկլեոտիդների (ddNTPs) ընտրովի ներառման վրա `ըստ ԴՆԹ in vitro ընթացքում պոլիմերազա ԴՆԹ վերօրինակման. Այն մշակվել է Ֆրեդերիկի կողմից Սենգեր եւ գործընկերները 1977 թ.
Բացի այդ, ինչպես է աշխատում շղթայի ավարտման հաջորդականությունը: Սանգեր ԴՆԹ հաջորդականություն հայտնի է նաև որպես շղթա - ավարտ մեթոդը հաջորդականություն . ddNTP- ները հանգեցնում են ավարտ ԴՆԹ-ի շղթայի պատճառով ddNTP- ները չունեն 3'-OH խումբ, որը պահանջվում է նուկլեոտիդների միջև ֆոսֆոդիեստերային կապի ձևավորման համար: Առանց այս կապի, շղթա ձևավորվող նուկլեոտիդներից է դադարեցվել է.
Պարզապես, ինչու ենք մենք անում Sanger հաջորդականությունը:
Սանգերի հաջորդականությունն է ա մեթոդ ի ԴՆԹ -ի հաջորդականացում հիմնված շղթայական վերջավոր դիդօքսինուկլեոտիդների ընտրովի ընդգրկման վրա ԴՆԹ in vitro ընթացքում պոլիմերազա ԴՆԹ վերօրինակման. Այն դեռևս առավելություն ունի կարճ ընթերցման նկատմամբ հաջորդականություն տեխնոլոգիաներ (ինչպես Illumina), որ դա կարող է արտադրել ԴՆԹ-ի հաջորդականությունը կարդում է ավելի քան 500 նուկլեոտիդ:
Արդյո՞ք Sanger- ի հաջորդականությունը ճշգրիտ է:
Սանգերի հաջորդականացում 99,99%-ով ճշգրտություն կլինիկական հետազոտությունների «ոսկե ստանդարտ» է հաջորդականություն . Այնուամենայնիվ, նոր NGS տեխնոլոգիաները նույնպես տարածված են դառնում կլինիկական հետազոտական լաբորատորիաներում՝ շնորհիվ իրենց բարձր թողունակության և մեկ նմուշի ավելի ցածր ծախսերի:
Խորհուրդ ենք տալիս:
Ի՞նչ է գործունեության հաջորդականությունը ծրագրի կառավարման մեջ:
Հաջորդական գործողություններ: Գործողությունների հաջորդականությունը ծրագրի գործողությունների միջև հարաբերությունների բացահայտման և փաստագրման գործընթացն է: Ծրագրի կառավարման մեջ այս տեսակի գործընթացի հիմնական առավելությունն այն է, որ այն սահմանում է աշխատանքի տրամաբանական հաջորդականությունը՝ հաշվի առնելով ծրագրի բոլոր սահմանափակումները առավելագույն արդյունավետություն ձեռք բերելու համար:
Ինչպե՞ս կարելի է նույնացնել ռեկոմբինանտ ԴՆԹ-ն:
Ռեկոմբինանտ ԴՆԹ (կամ rDNA) ստեղծվում է երկու կամ ավելի աղբյուրների ԴՆԹ-ի համատեղմամբ: Գործնականում գործընթացը հաճախ ենթադրում է տարբեր օրգանիզմների ԴՆԹ-ի համատեղում: Գործընթացը կախված է ԴՆԹ-ի մոլեկուլները կտրելու և նորից միացնելու ունակությունից այն կետերում, որոնք բացահայտված են նուկլեոտիդային հիմքերի հատուկ հաջորդականությամբ, որոնք կոչվում են սահմանափակման վայրեր:
Ինչպե՞ս են սահմանափակող ֆերմենտները շահարկում ԴՆԹ-ն:
Բակտերիան օգտագործում է սահմանափակող ֆերմենտ՝ պաշտպանվելու համար բակտերիոֆագներից կամ ֆագերից: Երբ ֆագը վարակում է բակտերիան, այն մտցնում է նրա ԴՆԹ-ն բակտերիաների բջջի մեջ, որպեսզի այն կարող է վերարտադրվել: Սահմանափակող ֆերմենտը կանխում է ֆագի ԴՆԹ-ի վերարտադրությունը՝ այն կտրելով բազմաթիվ կտորների
Ինչպե՞ս է PCR դերը դիդեօքսի ԴՆԹ-ի հաջորդականության մեջ:
Ինչպե՞ս է PCR դերը դիդեօքսի ԴՆԹ-ի հաջորդականության մեջ: ՊՇՌ-ի օգտագործումը թույլ է տալիս հայտնաբերել ԴՆԹ-ի սինթեզի մակարդակները կաղապարային ԴՆԹ-ի շատ ավելի ցածր մակարդակներից: Ինչու՞ է դիդեօքսինուկլեոտիդի ընդգրկումը ԴՆԹ-ի հաջորդականության ժամանակ նույնականացվում է որպես «վերարտադրության ավարտող» իրադարձություն:
Ինչու՞ ենք մենք օգտագործում Sanger հաջորդականությունը:
Sanger-ի հաջորդականությունը արդյունավետ մոտեցում է տարբերակային սքրինինգային ուսումնասիրությունների համար, երբ նմուշների ընդհանուր թիվը փոքր է: Տարբերակային սքրինինգային ուսումնասիրությունների համար, որտեղ նմուշի թիվը մեծ է, NGS-ով ամպլիկոնի հաջորդականությունն ավելի արդյունավետ և ծախսարդյունավետ է