Video: Ինչպե՞ս են օգտագործվում սահմանափակող ֆերմենտները գելային էլեկտրոֆորեզ կատարելիս:
2024 Հեղինակ: Stanley Ellington | [email protected]. Վերջին փոփոխված: 2023-12-16 00:18
1 Պատասխան. ԴՆԹ, ՌՆԹ կամ պլազմիդ կտրելու համար սահմանափակում կայքեր (ինչպես EcoRI, BamHI, hindIII և BglII)՝ ստեղծելու ավելի փոքր գենետիկ բեկորներ, որոնք կարող են առանձնացվել և այդպիսով բնութագրվել՝ օգտագործելով գել էլեկտրոֆորեզ.
Նմանապես կարելի է հարցնել՝ ո՞րն է սահմանափակող ֆերմենտների դերը:
Ա սահմանափակող ֆերմենտ սպիտակուց է, որը ճանաչում է հատուկ, կարճ նուկլեոտիդային հաջորդականությունը և կտրում է ԴՆԹ-ն միայն այդ կոնկրետ վայրում, որը հայտնի է որպես սահմանափակում կայքի կամ թիրախային հաջորդականությունը: Կենդանի բակտերիաներում, սահմանափակող ֆերմենտների գործառույթը պաշտպանել բջիջը ներխուժող վիրուսային բակտերիոֆագներից:
Բացի այդ, ինչպե՞ս գիտեք, թե որ սահմանափակող ֆերմենտը օգտագործել: Սահմանափակող ֆերմենտներ ընտրելիս ցանկանում եք ընտրել ֆերմենտներ, որոնք.
- Կտրեք ձեր ներդիրը, բայց մի կտրեք ձեր ներդիրի ներսում:
- Ձեր ստացող պլազմիդի ցանկալի վայրում են (սովորաբար Բազմակի կլոնավորման վայրում (MCS)), բայց մի կտրեք պլազմիդի այլ տեղ:
Բացի դրանից, ինչպե՞ս են օգտագործվում սահմանափակող ֆերմենտները հետազոտության մեջ:
Լաբորատորիայում, սահմանափակող ֆերմենտներ (կամ սահմանափակող էնդոնուկլեազներ ) են օգտագործված ԴՆԹ-ն ավելի փոքր բեկորների կտրելու համար: Կտրումները միշտ կատարվում են հատուկ նուկլեոտիդային հաջորդականությամբ: Տարբեր սահմանափակող ֆերմենտներ ճանաչել և կտրել ԴՆԹ-ի տարբեր հաջորդականությունները:
Ո՞րն է գելային էլեկտրոֆորեզի դերը:
Գելային էլեկտրոֆորեզ մեթոդ է, որն օգտագործվում է ԴՆԹ-ի բեկորներն ըստ չափերի առանձնացնելու համար: ԴՆԹ-ի նմուշները բեռնվում են հորերի (խորշերի) մեջ a-ի մի ծայրում գել , և էլեկտրական հոսանք է կիրառվում՝ դրանք քաշելու համար գել . ԴՆԹ-ի բեկորները բացասական լիցքավորված են, ուստի շարժվում են դեպի դրական էլեկտրոդ:
Խորհուրդ ենք տալիս:
Ինչու՞ են սահմանափակող ֆերմենտները կարևոր մոլեկուլային կենսաբանության մեջ:
Սահմանափակող ֆերմենտները բակտերիաներից մեկուսացված ֆերմենտներ են, որոնք ճանաչում են ԴՆԹ-ի հատուկ հաջորդականությունները և այնուհետև կտրում ԴՆԹ-ն՝ առաջացնելու բեկորներ, որոնք կոչվում են սահմանափակող բեկորներ: Սահմանափակող ֆերմենտները շատ կարևոր դեր են խաղում ԴՆԹ -ի ռեկոմբինանտ մոլեկուլների կառուցման գործում, ինչպես դա արվում է գենի կլոնավորման փորձերի ժամանակ
Ինչի՞ համար են օգտագործվում բնության մեջ սահմանափակող ֆերմենտները:
Սահմանափակող ֆերմենտ, որը նաև կոչվում է սահմանափակող էնդոնուկլեազ, բակտերիաների կողմից արտադրվող սպիտակուց, որը կտրում է ԴՆԹ-ն մոլեկուլի երկայնքով հատուկ վայրերում: Բակտերիաների բջիջում սահմանափակող ֆերմենտները կտրում են օտար ԴՆԹ-ն՝ այդպիսով վերացնելով վարակիչ օրգանիզմները
Ինչպե՞ս են սահմանափակող ֆերմենտները շահարկում ԴՆԹ-ն:
Բակտերիան օգտագործում է սահմանափակող ֆերմենտ՝ պաշտպանվելու համար բակտերիոֆագներից կամ ֆագերից: Երբ ֆագը վարակում է բակտերիան, այն մտցնում է նրա ԴՆԹ-ն բակտերիաների բջջի մեջ, որպեսզի այն կարող է վերարտադրվել: Սահմանափակող ֆերմենտը կանխում է ֆագի ԴՆԹ-ի վերարտադրությունը՝ այն կտրելով բազմաթիվ կտորների
Կարո՞ղ են սահմանափակող ֆերմենտները կտրել ՌՆԹ-ն:
Սահմանափակող ֆերմենտները նուկլեազներ են՝ ֆերմենտներ, որոնք կտրում են նուկլեինաթթվի պոլիմերները (այսինքն՝ ԴՆԹ և ՌՆԹ): Այս ֆերմենտների՝ հատուկ տեղամասերում ԴՆԹ-ն կտրելու ունակությունը բակտերիաներին տալիս է իմունային համակարգի մի տեսակ, որը կտրում և, հետևաբար, ապաակտիվացնում է օտար ԴՆԹ-ն, ինչպիսին է վիրուսները:
Ինչպե՞ս են սահմանափակող ֆերմենտները և լիգազան օգտագործվում կենսատեխնոլոգիայում:
Սահմանափակող ֆերմենտները ԴՆԹ կտրող ֆերմենտներ են: ԴՆԹ-ի լիգազան ԴՆԹ-ին միացնող ֆերմենտ է: Եթե ԴՆԹ-ի երկու կտոր ունեն համապատասխան ծայրեր, լիգազան կարող է դրանք կապել՝ ձևավորելով ԴՆԹ-ի մեկ, չկոտրված մոլեկուլ: ԴՆԹ-ի կլոնավորման ժամանակ սահմանափակող ֆերմենտները և ԴՆԹ-ի լիգազան օգտագործվում են գեները և ԴՆԹ-ի այլ մասերը պլազմիդների մեջ մտցնելու համար: