Ինչու է գլյուկոզան օգտագործվում պլազմիդային ԴՆԹ-ի մեկուսացման մեջ:

2024 Հեղինակ: Stanley Ellington | [email protected]. Վերջին փոփոխված: 2023-12-16 00:18

Այս քայլի նպատակն է մեծացնել բջիջների մեկնարկային ծավալը, որպեսզի ավելի պլազմիդային ԴՆԹ կարող է մեկուսացվել մեկ նախապատրաստման ընթացքում: Գլյուկոզա ավելացվում է բջիջներից դուրս օսմոտիկ ճնշումը բարձրացնելու համար: Tris-ը բուֆերային նյութ է օգտագործված պահպանել հաստատուն pH (= 8.0):

Նմանապես, ո՞րն է գլյուկոզայի դերը ԴՆԹ-ի արդյունահանման մեջ:

50 մմ (միլիմոլար) գլյուկոզա շաքար ավելացվում է GTE բուֆերին՝ օսմոլարությունը պահպանելու համար, որտեղ բջիջներից դուրս լուծվող նյութի կոնցենտրացիան մոտ է բջիջների ներսում: Սա կանխում է բջիջների վաղաժամ լիզումը, որը կարող է ավելի ցածր առաջացնել ԴՆԹ զիջում է ագրեգացման և դեգրադացիայի պատճառով:

Ավելին, ինչու է NaOH-ը օգտագործվում ԴՆԹ-ի արդյունահանման մեջ: Մեջ ԴՆԹ-ի մեկուսացում կամ արդյունահանում , ՆաՕՀ ( Նատրիումի հիդրօքսիդ ) է օգտագործված որպես ալկալային լիզի բուֆեր: Այն հիմնականում օգնում է լուծարել բջջային թաղանթը, որպեսզի բջջի ներքին բաղադրիչները, ներառյալ ԴՆԹ դուրս գալ.

Ո՞րն է պլազմիդային ԴՆԹ-ի մեկուսացման նպատակը:

Պլազմիդի մեկուսացում . Այն մեկուսացում ի պլազմիդային ԴՆԹ բակտերիաներից կարևոր տեխնիկա է մոլեկուլային կենսաբանության մեջ և էական քայլ է բազմաթիվ ընթացակարգերում, ինչպիսիք են կլոնավորումը, ԴՆԹ հաջորդականություն, տրանսֆեկցիա և գենային թերապիա: Այս մանիպուլյացիաները պահանջում են մեկուսացում բարձր մաքրությամբ պլազմիդային ԴՆԹ.

Ինչպե՞ս եք մեկուսացնում պլազմիդային ԴՆԹ-ն E coli-ից:

Այն մեկուսացում ի պլազմիդային ԴՆԹ-ից E . coli Ալկալային լիզի օգտագործումը լավ հաստատված մեթոդ է: Ե . coli հետ պլազմիդ մշակվում է միջատներում հակաբիոտիկներով մինչև բջիջների բարձր խտություն, հավաքվում և այնուհետև լուծվում SDS/NaOH լուծույթով: