Ինչպե՞ս է աշխատում Գիբսոնի կլոնավորումը:

2024 Հեղինակ: Stanley Ellington | [email protected]. Վերջին փոփոխված: 2023-12-16 00:18

Այն Գիբսոնի կլոնավորում Master Mix-ը բաղկացած է երեք տարբեր ֆերմենտներից մեկ բուֆերի մեջ: Յուրաքանչյուր ֆերմենտ ունի հատուկ և եզակի ֆունկցիա ռեակցիայի համար. T5 Exonuclease - ստեղծում է միաշղթա ԴՆԹ 3' ելուստներ՝ հետ ծամելով ԴՆԹ 5' ծայրից: Լրացուցիչ ԴՆԹ-ի բեկորները կարող են հետագայում զտվել միմյանց:

Հաշվի առնելով սա՝ ինչպե՞ս է աշխատում Գիբսոնը:

Այն Գիբսոն Assembly® մեթոդը կլոնավորման ընթացակարգ է, որը թույլ է տալիս կլոնավորել երկու կամ ավելի բեկորներ՝ առանց սահմանափակող ֆերմենտի մարսողության կամ համատեղելի սահմանափակման վայրերի անհրաժեշտության: Փոխարենը, օգտագործողի կողմից սահմանված համընկնող ծայրերը ներառված են բեկորների մեջ՝ թույլ տալու համար հարակից բեկորների անխափան միացումը:

Նմանապես, ի՞նչ կա Gibson Assembly Master Mix-ում: Այն Gibson Cloning Master Mix բաղկացած է երեք տարբեր ֆերմենտներից մեկ բուֆերի մեջ: Յուրաքանչյուր ֆերմենտ ունի հատուկ և եզակի ֆունկցիա ռեակցիայի համար՝ T5 Exonuclease - ստեղծում է միաշղթա ԴՆԹ 3' ելուստներ՝ հետ ծամելով ԴՆԹ 5' ծայրից: Լրացուցիչ ԴՆԹ-ի բեկորները կարող են հետագայում զտվել միմյանց:

Այս կերպ ինչպե՞ս է աշխատում Golden Gate հավաքը:

Ոսկե դարպաս կլոնավորում կամ Golden Gate ժողովը մոլեկուլային կլոնավորման մեթոդ, որը թույլ է տալիս հետազոտողին միաժամանակ և ուղղորդված կերպով հավաքել ԴՆԹ-ի բազմաթիվ բեկորներ մեկ կտորի մեջ՝ օգտագործելով IIs տիպի սահմանափակող ֆերմենտները և T4 ԴՆԹ լիգազան: Սա ժողովն է իրականացվում է in vitro.

Ինչպե՞ս է աշխատում Gateway-ի կլոնավորումը:

Այն GATEWAY կլոնավորում Տեխնոլոգիան հիմնված է տեղային հատուկ ռեկոմբինացիոն համակարգի վրա, որն օգտագործվում է ֆագ l-ի կողմից՝ իր ԴՆԹ-ն E-ում ինտեգրելու համար: Ներդիր ֆագի ԴՆԹ-ն շրջապատող attL և attR տեղամասերը վերամիավորվում են հատուկ տեղահանման իրադարձության ժամանակ՝ բարեփոխելու attP տեղանքը l-ում և ֆագում: attB կայքը Ե.